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2 Junio, 2021
Una vez que las pruebas biológicas de interés genético han sido debidamente recolectadas y llevadas al laboratorio para su análisis, las primeras etapas de este corresponden a la extracción y purificación de ADN y posteriormente a su cuantificación.


Una vez que las pruebas biológicas de interés genético han sido debidamente recolectadas y llevadas al laboratorio para su análisis, las primeras etapas de este corresponden a la extracción y purificación de ADN y posteriormente a su cuantificación. Ya que ha sido cuantificado el ADN obtenido, este se debe «tipificar», es decir, obtener el o los perfiles genéticos presentes, esto a partir de la amplificación por PCR de diversos STRs (secuencias cortas en tándem, normalmente con una longitud de 2 a 5 pares de bases).

La reacción en cadena de la ADN polimerasa (PCR por sus siglas en inglés) tiene tres pasos concretos que se repiten, en donde un fragmento de ADN conocido es copiado y amplificado billones de veces.

El primer paso es la desnaturalización, en dónde a través de una alta temperatura se separan las dos cadenas que conforman la molécula de ADN. El segundo paso consiste en la disminución de temperatura a fin de lograr que los cebadores (o primers) se unan a las cadenas separadas del ADN en la región específica que corresponda al STR. El último paso es el aumento de temperatura a un valor ideal para que la enzima taq polimerasa sintetice el ADN de la región de interés (el STR). Luego el ciclo vuelve a comenzar incrementando la temperatura para separar las cadenas de ADN y así sucesivamente.

Hoy en día, las investigaciones y avances tecnológicos han dado paso a la PCR múltiple (en inglés multiplex), que permite la amplificación simultánea de un gran número de STRs en un solo paso o PCR. Actualmente existe una gran variedad de kits para la amplificación simultánea de los loci de STRs (también llamados marcadores genéticos). El número de marcadores que se amplifican en estos kits pocas veces está debajo de 9, los más utilizados amplifican 15 loci y actualmente hay algunos con los que se obtienen más de 20 marcadores, casi todos ellos amplifican, además de marcadores autosómicos, un marcador de cromosomas sexuales llamado Amelogenina, útil para la determinación del sexo. Un ejemplo ilustrativo de esto son los kits comercializados por ZOGBI. El sistema PowerPlex(R) Fusion 6C de Promega es un multiplex de 27 locis con una química de 6 colores para aplicaciones de identificación humana, incluyendo análisis forense, pruebas de relación e investigación y determinación de sexo.

La amplificación de un gran número de marcadores genéticos simultáneamente, resulta en la obtención de muchos alelos de diferentes marcadores mezclados. Entonces, para resolver esta situación existen diferentes tamaños para los productos amplificados de cada locus, además los cebadores se identifican con diferentes fluoróforos o colores, para que por medio de la electroforesis capilar se separen los alelos de cada locus o marcador genético, por tamaño y por color.

En una situación ideal, después de 32 ciclos se han generado aproximadamente mil millones de copias de la región de interés. Este producto de PCR, se encuentra entonces en cantidad suficiente para que pueda medirse fácilmente.

Autor :Equipo Expresión Forense